小貝傾情助力細胞外囊泡研究

zui近，小貝家分別在北京和廣州舉辦了“細胞外囊泡專題研討班”，獲得老師和同學們熱情的參與，有的甚至千里迢迢、不遠*專程參加。

是什么引起大家如此高漲的參與熱情呢？

當前研究的熱點——外泌體。

對于外泌體（又稱細胞外囊泡，Extracellular Vesicles），相信大家都不陌生，它是指細胞膜上脫落或由細胞分泌的，具有雙層膜結(jié)構(gòu)囊泡狀異質(zhì)性群體，包括外泌體（Exs）、膜微粒（MP）和微囊泡(EVs)。細胞外囊泡和細胞內(nèi)囊泡，有著相似的磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)，包含有蛋白和核酸等生物大分子，大小在40nm-1000nm，是細胞進行物質(zhì)運輸、信號轉(zhuǎn)導、實現(xiàn)生理功能的重要工具。細胞外囊泡廣泛存在于細胞培養(yǎng)上清及各種體液，參與細胞間通訊、細胞遷移和免疫調(diào)節(jié)等多種反應。囊泡水平升高與糖尿病、艾滋病以及癌癥等疾病相關(guān)，有望成為這類疾病的診斷及評估疾病預后標志物。如今，越來越多的研究者開始著眼于對細胞外囊泡進行準確的定型和定量研究。2013年10月7日，諾貝爾生理學或醫(yī)學獎授予了發(fā)現(xiàn)細胞囊泡運輸調(diào)控機制的三位科學家。
 

外周血中有著大量的外泌體，來自不同的細胞。另外，外泌體和腫瘤微環(huán)境、腫瘤細胞遷移有著神秘。對于這些未知的領(lǐng)域，目前還缺乏研究，主要原因在于對于這種200nm以下顆粒的檢測，顯微鏡顯得力不從心，電鏡又高不可及。因此強大的工具和的解決方案的顯得尤其重要。

有鑒于此，我們有幸邀請到了來自 Beth Israel Deaconess Medical Center and Harvard Medical School的Vasilis Toxavidis和John Tigges——兩位有著豐富的流式細胞術(shù)和外泌體研究經(jīng)驗的學者，請他們和國內(nèi)的學者進行外泌體研究的交流，分享經(jīng)驗。

8月24日，首都北京，驕陽似火，然而參加“貝克曼庫爾特細胞外囊泡專題研討班-北京站”活動的老師和同學，有著勝似驕陽的熱情，有圖為證。現(xiàn)場不得不臨時加座，才能滿足大家學習和交流的熱情。
 

8月29日，羊城廣州，驟雨初歇，寒潮來襲，公路上隨處可見臺風肆略的痕跡，這些卻絲毫沒有阻擋來自全國各地的40多位老師的腳步。大家齊聚中山大學，熱情參與我們廣州站的活動。
 

兩場研討班，早上均為報告部分。Vasilis Toxavidis和John Tigges從理論角度講述了外泌體檢測的問題、誤區(qū)和解決方案；從散射光檢測原理、流式細胞儀硬件、再到樣本制備，系統(tǒng)的闡述了外泌體的檢測，并以實例講述了心肌細胞源外泌體和紅細胞源外泌體的研究結(jié)果，提出了Nano Flow Cytometry（NanoFACS）的概念。

首先，來自美國哈佛干細胞研究所資源總監(jiān)、哈佛醫(yī)學院貝斯以色列女執(zhí)事醫(yī)療中心流式技術(shù)平臺負責人Vasilis Toxavidis先為大家做了流式分析EVs的技術(shù)原理、硬件可行性等方面的報告。Vasilis以MoFloXDP和CytoFLEX為教學案例，深入淺出地講解，時時博得與會者的掌聲，給大家提供了流式在微顆粒檢測研究的新思路。
 

隨后，美國哈佛醫(yī)學院貝斯以色列女執(zhí)事醫(yī)療中心外囊泡檢測中心主任John Tigges進一步介紹了利用流式細胞術(shù)研究細胞外囊泡， 并結(jié)合HF患者EVs檢測案例，抽絲剝繭，逐一分析如何解決細胞外囊泡檢測中問題、缺陷，闡述EVs在疾病研究中的實際意義，使大家茅塞頓開。其幽默的演講風格也深受老師們喜愛，引得臺下提問連連，將整個研討會推上了小高潮。
 

接著，來自貝克曼庫爾特生命科學部的霍德華，講述了貝克曼庫爾特的超高速離心機——Optima XPN在樣本制備和外泌體獲取方面的完整工作流程。超速離心分離，是從生物體液和細胞培養(yǎng)樣品中分離純化外泌體的黃金標準，可以準確地重復獲取外泌體，同時zui大限度減少蛋白質(zhì)聚集體和其他膜離子的共純化。
 

上午的理論部分結(jié)束后，大家對細胞外囊泡檢測，超離技術(shù)助力樣本采集和流式技術(shù)助力囊泡研究有了全面、清晰、深刻的認識。

北京站的實驗操作部分，在中科院過程工程研究所的、陣容強大的三臺CytoFLEX流式細胞分析儀旁展開。John Tigges和Vasilis Toxavidis現(xiàn)場演示了如何在CytoFLEX上進行外泌體的檢測。利用CytoFLEX的WDM技術(shù)和靈活的濾光片調(diào)整特點，John Tigges輕松實現(xiàn)200nm以下的顆粒檢測，并找到外周血中神秘的外泌體。

CytoFLEX使用VSSC檢測Megamix-Plus微球結(jié)果及線性表現(xiàn)：
 

CytoFLEX檢測血液中的細胞外囊泡結(jié)果：
 

由于FAPD的優(yōu)勢CytoFLEX對顆粒大小的檢測保持很好的線性。出眾的分辨率不僅能將噪音與細胞外囊泡很好的分開，而且還可以對外囊泡群體進行細分，分別研究其抗體表達情況。
 

廣州站的實踐操作部分在中山大學北校區(qū)醫(yī)學院實驗室進行。大家在兩位美國專家的指導下，領(lǐng)略了MoFlo Astrios EQ和CytoFLEX檢測細胞外囊泡的神奇魅力。EVs的大小通常只有40nm-100nm，超出傳統(tǒng)流式的檢測范圍。但MoFlo Astrios EQ的增強型雙前向角設(shè)計和CytoFLEX的雪崩光電二極管以超高的分辨率和靈敏度，有效地區(qū)分噪音信號和檢測囊泡。連續(xù)五輪操作培訓，讓操作者切身感受了一把迅速快捷、多參數(shù)細胞外囊泡檢測。
 

兩場培訓班內(nèi)容豐富、實用，而又易于理解。到會的老師和同學紛紛表示獲益匪淺。貝克曼庫爾特的超高速離心機（Optima XPN）和超靈敏流式細胞儀（CytoFLEX）實現(xiàn)了雙劍合璧，為科研工作者提供了且可行的外泌體檢測解決方案。
 

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* 本產(chǎn)品僅用于科研，不用于臨床診斷。
(此項活動得到中國科學院過程工程所和中山大學的大力協(xié)助，特此表示感謝！)