硫是原油中含量豐富的元素之一。通過(guò)化石燃料燃燒在環(huán)境中釋放有害的硫氧化物（SO2）會(huì)加劇空氣污染，在世界范圍內(nèi)造成嚴(yán)重的生態(tài)危害問(wèn)題。燃料中存在的硫酸鹽顆粒物也會(huì)通過(guò)腐蝕降低發(fā)動(dòng)機(jī)的壽命。傳統(tǒng)化學(xué)工藝加氫脫硫（HDS）將化石燃料中的硫轉(zhuǎn)化為污染較小的化合物硫化氫，但需要高溫高壓，投資巨大、運(yùn)行成本高，同時(shí)二苯并噻吩（DBT）和4,6-二甲基二苯并噻吩（DBT）難以從石油中去除。

生物脫硫（BDS）可在溫和的加工條件下降低燃料難熔有機(jī)化合物的含硫量，具有更大的成本效益。脫硫細(xì)菌可利用DBT及其衍生物中的硫來(lái)維持其生長(zhǎng)并獲得能量，具有“Kodama途徑"和“4S途徑"2種。Bordoloi NK等人從石油污染土壤中分離出一種新細(xì)菌螯合球菌屬，可以在多種噻吩化合物中生長(zhǎng)，產(chǎn)生2-MBP而不是2-HBP作為最終產(chǎn)品，對(duì)細(xì)菌的毒性要小得多，同時(shí)減少環(huán)境污染，具有中溫生長(zhǎng)條件下柴油燃料生物催化脫硫的潛在應(yīng)用，并降低BDS過(guò)程中能耗。

重質(zhì)原油的真空渣油餾分是油的粘度大的主要原因。而烷基硫化物橋中C-S鍵的特異性微生物裂解，在該部分中形成鍵，可能導(dǎo)致粘度急劇降低。從油污染環(huán)境中分離出一種獨(dú)特的細(xì)菌菌株，紅球菌屬菌株JVH1，它使用雙-（3-五氟苯基丙基）-硫化物（PFPS）作為的硫源氧化為亞砜，然后在裂解C-S鍵之前氧化成砜，形成醇，并可能形成硫酸鹽，從中提取硫進(jìn)行生長(zhǎng)。微生物降解重質(zhì)原油以降低粘度的潛力被認(rèn)為在微生物增采率（MEOR）中非常有效，早期研究基于三個(gè)廣泛領(lǐng)域：

嗜熱孢子形成細(xì)菌可以在油藏中非常不好的條件下繁殖，因此它們是適合提高稠油采收率研究的微生物。通過(guò)微生物這種極低的運(yùn)行成本技術(shù)的方法，可以在占世界石油總儲(chǔ)量67%的油藏中提取高達(dá)50%的殘余油。此外，其他的微生物系統(tǒng)也被廣泛研究用于實(shí)驗(yàn)室和采油現(xiàn)場(chǎng)測(cè)試。

烯烴加氫是石油精煉中的一個(gè)重要過(guò)程，但也存在催化劑中毒、大量傳輸限制、發(fā)熱以及與氫氣、儲(chǔ)存和催化劑等相關(guān)的各種障礙。由于這些原因，使用工程微生物在體內(nèi)進(jìn)行烯烴加氫已成為能夠克服這些障礙的潛在替代方案，此外，隨著合成生物學(xué)工具和高通量篩選（HTS）技術(shù)變得更加經(jīng)濟(jì)實(shí)惠和容易獲得，大腸桿菌或釀酒酵母等微生物越來(lái)越多地被用于在工業(yè)規(guī)模上生物合成具有重要商業(yè)意義的氫化烯烴的酶，包括老黃酶、烯酮還原酶和脂肪酸烯酰還原酶。

在耐熱嗜酸古生菌中分離出的香葉基香葉酰還原酶（GGR），可以不對(duì)稱(chēng)地還原2,3-二-O-香葉基香葉酰甘油磷酸鹽中的所有八個(gè)異戊二烯基單元，GGR也可以減少由于甲羥戊酸或DXP途徑合成的多種基于C15-C20異戊二烯的中間體，GGR在約55℃時(shí)表現(xiàn)出最佳活性，因此需要進(jìn)行大量的酶工程來(lái)改善其性能，使其用于大腸桿菌或釀酒酵母等工程微生物菌株以生產(chǎn)各種飽和聚異戊二烯化合物。通過(guò)開(kāi)發(fā)新的篩選工作流程，用來(lái)確定與工程化GGR蛋白庫(kù)相關(guān)的酶活性和產(chǎn)物形成譜。通過(guò)使用Biomek FX液體處理工作站搭配PhyNexus Ni-IMAC tips（20 μL resin bed）對(duì)過(guò)濾后的細(xì)胞裂解液中的GGR進(jìn)行純化，隨后使用Biomek FX從WebSeal Plate + 96孔玻璃包被孔板中轉(zhuǎn)移酶反應(yīng)液至384孔板中進(jìn)行液相萃取。

在檢測(cè)步驟，使用Echo將環(huán)氧化反應(yīng)產(chǎn)物“打印"涂覆在薄層二氧化硅上，根據(jù)環(huán)氧化程度進(jìn)行色譜分離，并與發(fā)色團(tuán)共價(jià)連接，從而可以檢測(cè)具有獨(dú)特產(chǎn)物分布或增強(qiáng)還原酶活性的酶變體。經(jīng)過(guò)GC-MS驗(yàn)證，這種基于薄層色譜的篩選可以區(qū)分選定突變體酶活性的四倍差異。相比于LC/GC-MS復(fù)雜的工作流程和分析時(shí)間，使用Echo納升級(jí)聲波移液系統(tǒng)和薄層色譜搭建的自動(dòng)化96孔篩選平臺(tái)極大地提高了檢測(cè)速度，使并行多個(gè)樣品檢測(cè)即時(shí)可視化，讀值結(jié)果更可靠，成為一種高效的篩選流程。

石油中的碳?xì)浠衔锍煞衷诨罱M織中持久、生物積累和生物放大，并對(duì)人類(lèi)健康和生態(tài)系統(tǒng)產(chǎn)生有害影響。使用細(xì)菌等微生物進(jìn)行生物增強(qiáng)是一種新興方法，可以減輕環(huán)境來(lái)源的毒素。降解碳?xì)浠衔锏募?xì)菌、藻類(lèi)、酵母和真菌在海洋、淡水和土壤生態(tài)系統(tǒng)中含量豐富。通過(guò)連續(xù)稀釋法，Hussain N等人從受污染加油站土壤中分離石油降解菌蠟樣芽孢桿菌，培養(yǎng)72小時(shí)時(shí)生物量最大，并可去除75%石油，并通過(guò)生化表征，確定了該菌存在甲烷、甲基環(huán)己烷、甲苯、二甲苯和苯降解途徑。相對(duì)于傳統(tǒng)對(duì)總石油烴采取的緩解措施如浮選、超聲處理、焚燒、動(dòng)電修復(fù)、微波頻率加熱、熱解吸，以及合成洗滌劑/表面活性劑、土壤沖洗技術(shù)和光催化去除組成的物理化學(xué)方法，這一生物修復(fù)技術(shù)更加經(jīng)濟(jì)高效環(huán)保。

早在2010年，使用大腸桿菌作為生產(chǎn)生物體，葡萄糖作為碳源，從發(fā)酵罐的廢氣中回收異戊二烯并合成橡膠，實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)生物異戊二烯。與異戊二烯形成聚合物用于生產(chǎn)丁基橡膠的是異丁烯（2-甲級(jí)丙烯），后者是許多化學(xué)品的關(guān)鍵前體，也可作為燃料，目前通過(guò)石化裂解原油大規(guī)模生產(chǎn)，但同樣在2010年Global Bioenergies公司為其生物基異丁烯發(fā)酵生產(chǎn)研究申請(qǐng)了，由于異丁烯在發(fā)酵條件下是一種氣態(tài)化合物，因此很容易從生物反應(yīng)器中回收，與使用化石原料相比，可再生生物基生產(chǎn)為化學(xué)品和燃料的可持續(xù)生產(chǎn)提供了有趣的替代方案。

生物異丁烯的形成被證明是由異戊酸脫羧、3-羥基異戊酸酯的脫水和異丁醇脫水催化反應(yīng)轉(zhuǎn)化形成，負(fù)責(zé)酶是微粒體細(xì)胞色素P450、甲羥戊酸二磷酸脫羧酶MDD和油酸水合酶等。在細(xì)胞色素P450作為NADPH還原酶產(chǎn)生異丁烯的菌株篩選測(cè)試時(shí)，Fukuda等人從80屬的178個(gè)測(cè)試菌株中總共篩選出33種真菌、31種酵母和6種細(xì)菌在有氧條件下產(chǎn)生了微量異丁烯。MDD是一種參與麥角甾醇或低等異戊二烯生物合成的酶，雖然MDD家族存在于多種微生物種，但這些微生物都不會(huì)自然產(chǎn)生異丁烯，通過(guò)合成方法Bobik等人設(shè)計(jì)了一種合成方法，將MDD脫羧活性表達(dá)到大腸桿菌底盤(pán)細(xì)胞，通過(guò)3-羥基異戊酸鹽誘導(dǎo)異丁烯生物合成。異丁醇脫水轉(zhuǎn)化通常使用酸、氧化鋁、二氧化硅催化劑和金屬鹽等在大于100℃下完成，但從假單胞菌屬的腦膜敗血伊麗莎白金菌中純化出的油酸水合酶克隆并表達(dá)在大腸桿菌中，可對(duì)上述催化反應(yīng)進(jìn)行生物基生產(chǎn)替代。分子生物學(xué)工具和遺傳可及性的可用性對(duì)于促進(jìn)菌株開(kāi)發(fā)計(jì)劃的快速進(jìn)展至關(guān)重要，同時(shí)，為了實(shí)現(xiàn)菌株高通量構(gòu)建和篩選、發(fā)酵條件的優(yōu)化，高通量平臺(tái)的搭建也至關(guān)重要。

塑料是石化產(chǎn)品制成的聚合物，為現(xiàn)代社會(huì)帶來(lái)方便的同時(shí)，塑料垃圾及塑料污染也極大影響人們的生活。全球每年生產(chǎn)約3.8億噸塑料垃圾，由于其低自然降解特性，目前處理方式有填埋、焚燒，這將會(huì)造成地下水、土壤和空氣污染。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)可以在短時(shí)間內(nèi)消化和降解塑料，采用一種基于氧化還原指標(biāo)2,6-二氯苯吩多苯酚的新篩選方法，從昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)中分離出一種聚乙烯降解細(xì)菌——Acinetobacter guillouiae。

塑料的烷烴主鏈結(jié)構(gòu)可被烷烴單加氧酶羥基化生成醇，醇經(jīng)醇脫氫酶轉(zhuǎn)化為醛，該醛經(jīng)醛脫氫酶轉(zhuǎn)化為脂肪酸，然后脂肪酸通過(guò)脂質(zhì)代謝途徑降解，蛋白質(zhì)組學(xué)研究表明，當(dāng)塑料是可用的碳源時(shí)，參與烷烴和脂質(zhì)代謝的酶的表達(dá)水平在微生物中會(huì)上調(diào)。烷烴羥基化和醇脫氫是聚乙烯降解的關(guān)鍵步驟。除此之外，綠銅假單胞菌也是是一種有效的PE降解微生物，可降解如PVC、聚氨酯和聚3-羥基丁酸酯。

常見(jiàn)的一種熱性塑料對(duì)苯二甲酸乙二醇酯PET所生產(chǎn)的豐富的日常產(chǎn)品中80%以上都是一次性使用，而全球每年2500百萬(wàn)噸每年的PET產(chǎn)品消費(fèi)量也導(dǎo)致了塑料廢物危機(jī)。發(fā)展新可持續(xù) 生物基方法將廢碳增值成工業(yè)小分子是一種優(yōu)雅的經(jīng)濟(jì)的創(chuàng)建循環(huán)化學(xué)品方法。通過(guò)化學(xué)和解聚的生物學(xué)方法進(jìn)行生物升級(jí)再造技術(shù)，將生活和工業(yè)PET中的對(duì)苯二甲酸酯廢棄物使用大腸桿菌底盤(pán)微生物生物轉(zhuǎn)化為工業(yè)化學(xué)品和尼龍前體己二酸（AA）正在成為可能，同時(shí)，由于AA每年的消耗約為260萬(wàn)噸，且多用于材料、藥品香水和化妝品行業(yè)，因此從可再生原料中生物生產(chǎn)AA方案十分有吸引力。

通過(guò)以上內(nèi)容我們不難發(fā)現(xiàn)，微生物在石油化工的各個(gè)方面都正在扮演重要角色，極大影響石油化工生產(chǎn)等多方面的效率，同時(shí)，也為改善由于泄露等導(dǎo)致的污染問(wèn)題提供了及其重要的治理角色。

我們不妨可以發(fā)散一下思維，在微生物以及合成生物學(xué)快速發(fā)展的當(dāng)今，高通量篩選的自動(dòng)化即將加速微生物在石油化工領(lǐng)域的應(yīng)用與創(chuàng)新。從生物原件處理、基因編輯菌株構(gòu)建系統(tǒng)、蛋白表達(dá)純化及表征系統(tǒng)、質(zhì)譜前處理及代謝產(chǎn)物檢測(cè)系統(tǒng)和菌種發(fā)酵條件優(yōu)化系統(tǒng)全流程，貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)具有成熟的經(jīng)驗(yàn)和落地案例，可幫助加速石油化工菌株篩選、生物轉(zhuǎn)化和生物基生產(chǎn)等過(guò)程。